Метод посева или культуральный метод выявления микобактерий. Этот метод отличается большой чувствительностью и имеет ряд преимуществ перед методом микроскопии. Он позволяет выявить микобактерий туберкулеза при наличии в исследуемом патологическом материале нескольких десятков жизнеспособных особей. Если сопоставить эту цифру с 10 000-100 000 микробных тел, присутствие которых необходимо в 1 мл материала для бактериоскопического выявления, то станет ясна значительно более высокая чувствительность метода посева. Это особенно важно при исследовании материала от впервые выявленных или уже леченных больных, выделяющих малые количества микобактерий.
Очень важным преимуществом метода культурального исследования является возможность получения культуры возбудителя, которая может быть подробно исследована, идентифицирована и изучена в отношении ее лекарственной чувствительности, вирулентности и других свойств. Однако необходимо отметить, что существует ряд факторов, ограничивающих широкое применение метода культивирования, в частности его высокая стоимость, известные ограничения, связанные со сложностью обработки патологического материала, медленным размножением микобактерий туберкулеза и, следовательно, необходимостью долго ждать результатов исследования. Все это снижает ценность метода, не дает возможности оперативно использовать полученные результаты в клинике и диктует необходимость проведения широкого поиска как более совершенных методов, так и более совершенных питательных сред, которые позволили бы ускорить получение результатов и повысить эффективность и чувствительность метода.
Бактериологическому исследованию подвергается самый разнообразный материал: мокрота, промывные воды бронхов и желудка, экссудаты, отделяемое ран и свищей, моча, спинномозговая жидкость, материалы биопсии и бронхоальвеолярного лаважа, органы экспериментальных животных и патологоанатомический материал. Материал для исследования должен доставляться в лабораторию в стерильной хорошо закрытой посуде. Перед посевом на питательные среды материал предварительно обрабатывают, что преследует двоякую цель:
- максимально гомогенизировать материал, подлежащий исследованию, с тем чтобы содержащиеся в нем микобактерии равномерно распределились в его объеме, чем облегчается их выделение;
- необходимо «подавить» все другие микроорганизмы (гноеродные и гнилостные), содержащиеся в материале исследования, с тем чтобы в дальнейшем они как более быстро растущие не мешали росту микобактерии и не использовали приготовленные для микобактерии питательные вещества среды.
С этой целью для обработки патологического материала перед посевом на питательные среды используют различные реактивы. Это должно обеспечивать гомогенизацию материала, полностью подавлять рост неспецифической гноеродной и гнилостной микрофлоры, которая может находиться в исследуемом материале, и максимально сохранять жизнеспособность присутствующих в материале микобактерии. Перед посевом исследуемый материал нужно сконцентрировать и освободить от сопутствующей гноеродной микрофлоры. Для этого мокроту, экссудаты и другой материал помещают в стерильную склянку с бусами или битым стеклом и обрабатывают щелочью или кислотой. Жидкие материалы предварительно центрифугируют, и дальнейшей обработке подвергают только осадок. В настоящее время для обработки патологического материала применяют следующие методы и детергенты.
- Метод Гона — обработка растворами серной кислоты (2—6%) в зависимости от характера материала и степени его загрязненности неспецифической микрофлорой с последующим центрифугированием и отмыванием.
- Метод Петрова — обработка 4% раствором bIаОН с последующим центрифугированием и нейтрализацией осадка перед посевом; этот метод удобно использовать при одновременной обработке большого количества посевов. Щелочь растворяет белковые частицы, что способствует быстрой гомогенизации мокроты и других материалов, содержащих гной и слизь, и высвобождению из этих белковых частиц микобактерии туберкулеза.
- Обработка 3% раствором серной кислоты в течение 20 мин (10 мин в спокойном состоянии, 10 мин при центрифугировании) с последующим 3-кратным отмыванием осадка стерильным изотоническим раствором.
- Обработка 1% раствором серной кислоты после тщательной гомогенизации в течение 18—20 ч при комнатной температуре (метод Б.Я. Циммер).
- Обработка 10% раствором трехзамещенного фосфата натрия. Это широко распространенный в нашей стране метод, допускающий длительную экспозицию материала с фосфатом натрия без нарушения жизнеспособности микобактерии, что особенно ценно в тех случаях, когда доставка материала затруднена. Трехзамещенный фосфат натрия хорошо угнетает сопутствующую флору и даже при 2-х, 3-х дневном хранении материала не повреждает микобактерии и мало влияет на их способность к росту на питательных средах. Метод можно применять в двух модификациях: с нейтрализацией материала или без нейтрализации. В последнем случае к осадку после центрифугирования добавляют 1 мл жидкой среды Школьниковой и полученную смесь полностью засевают на питательные среды.
- При посеве сильно загрязненного материала используют более концентрированные растворы серной кислоты (5%).
Следует отметить, что поиски веществ, подходящих для обработки материала перед посевом, ведутся постоянно. Так, несколько лет назад было закончено коллективное исследование стран СЭВ по сравнительному испытанию подобных веществ. В качестве детергентов испытывались различные соединения: лауросепт X, некал ВХ, лаурилсульфат, хлоргексидин биглюконат и др. Оптимальные результаты были получены при применении лауросепта, который повысил на 16 % частоту выделения микобактерии туберкулеза. Однако отсутствие этого детергента ограничивает возможности его широкого применения на практике.